Nature.com भ्रमण गर्नुभएकोमा धन्यवाद।तपाईंले प्रयोग गरिरहनुभएको ब्राउजर संस्करणमा सीमित CSS समर्थन छ।उत्तम अनुभवको लागि, हामी तपाईंलाई अपडेट गरिएको ब्राउजर प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं (वा इन्टरनेट एक्सप्लोररमा अनुकूलता मोड असक्षम गर्नुहोस्)।यस बीचमा, निरन्तर समर्थन सुनिश्चित गर्न, हामी शैली र जाभास्क्रिप्ट बिना साइट रेन्डर गर्नेछौं।
टोक्सोप्लाज्मा गोन्डी एक इन्ट्रासेलुलर प्रोटोजोआन परजीवी हो जसले संक्रमित होस्टको सूक्ष्म वातावरणलाई परिमार्जन गर्दछ र ब्रेन ट्युमरको वृद्धिको घटनासँग सम्बन्धित छ भनेर चिनिन्छ।यस अध्ययनमा, हामी अनुमान गर्छौं कि टोक्सोप्लाज्मा संक्रमणबाट एक्सोसोमल miRNA-21 ले ब्रेन ट्युमरको वृद्धिलाई बढावा दिन्छ।Toxoplasma-संक्रमित BV2 microglia बाट Exosomes को विशेषता थियो र U87 glioma कोशिकाहरु को आन्तरिककरण पुष्टि भयो।Exosomal microRNA अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरू Toxoplasma gondii र ट्यूमर क्रमबद्धसँग सम्बन्धित microRNA र microRNA-21A-5p को arrays प्रयोग गरेर विश्लेषण गरियो।हामीले U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूमा ट्युमर-सम्बद्ध जीनहरूको mRNA स्तरहरू पनि exosomes मा miR-21 स्तरहरू परिवर्तन गरेर र मानव U87 glioma सेल प्रसारमा exosomes को प्रभावलाई पनि अनुसन्धान गर्यौं।Toxoplasma gondii बाट संक्रमित U87 glioma कोशिकाहरूको exosomes मा, microRNA-21 को अभिव्यक्ति बढाइन्छ र एन्टिट्यूमर जीन (FoxO1, PTEN, र PDCD4) को गतिविधि कम हुन्छ।टोक्सोप्लाज्माबाट संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूले U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूको प्रसारलाई प्रेरित गर्छ।Exosomes ले माउस ट्यूमर मोडेलमा U87 कोशिकाहरूको वृद्धिलाई प्रेरित गर्दछ।हामी सुझाव दिन्छौं कि टोक्सोप्लाज्मा-संक्रमित BV2 माइक्रोग्लियामा बढेको exosomal miR-21 ले एन्टिट्यूमर जीनलाई डाउनरेगुलेट गरेर U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूमा सेल वृद्धि प्रमोटरको रूपमा महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्न सक्छ।
यो अनुमान गरिएको छ कि 2018 मा विश्वव्यापी रूपमा उन्नत क्यान्सरका 18.1 मिलियन भन्दा बढी केसहरू निदान गरिएको थियो, प्रत्येक वर्ष लगभग 297,000 केन्द्रीय स्नायु प्रणाली ट्यूमरहरू (सबै ट्यूमरहरूको 1.6%) निदान गरिएको थियो।अघिल्लो अनुसन्धानले देखाएको छ कि मानव मस्तिष्क ट्यूमरको विकासको लागि जोखिम कारकहरूमा विभिन्न रासायनिक उत्पादनहरू, पारिवारिक इतिहास, र टाउको चिकित्सीय र निदान उपकरणहरूबाट आयनाइजिंग विकिरण समावेश छन्।यद्यपि, यी घातक रोगहरूको सही कारण अज्ञात छ।लगभग 20% विश्वभरका क्यान्सरहरू भाइरस, ब्याक्टेरिया र परजीवीहरू सहित संक्रामक एजेन्टहरूबाट हुने गर्दछ।संक्रामक रोगजनकहरूले होस्ट सेलको आनुवंशिक संयन्त्रहरू, जस्तै DNA मर्मत र सेल चक्रमा बाधा पुर्‍याउँछ, र दीर्घकालीन सूजन र प्रतिरक्षा प्रणालीलाई क्षति पुर्‍याउन सक्छ।
मानव क्यान्सरसँग सम्बन्धित संक्रामक एजेन्टहरू मानव प्यापिलोमाभाइरस र हेपाटाइटिस बी र सी भाइरसहरू सहित सबैभन्दा सामान्य भाइरल रोगजनक हुन्।परजीवीहरूले पनि मानव क्यान्सरको विकासमा सम्भावित भूमिका खेल्न सक्छन्।Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis र Hymenolepis nana जस्ता धेरै परजीवी प्रजातिहरू मानव क्यान्सर 6,7,8 मा संलग्न छन्।
टोक्सोप्लाज्मा गोन्डी एक इन्ट्रासेलुलर प्रोटोजोआन हो जसले संक्रमित होस्ट कोशिकाहरूको सूक्ष्म वातावरणलाई विनियमित गर्दछ।यो परजीवीले विश्वको जनसंख्याको लगभग 30% लाई संक्रमित गर्ने अनुमान गरिएको छ, जसले सम्पूर्ण जनसंख्यालाई 9,10 जोखिममा राख्छ।टोक्सोप्लाज्मा गोन्डीले केन्द्रीय स्नायु प्रणाली (CNS) लगायतका अत्यावश्यक अंगहरूलाई संक्रमित गर्न सक्छ र घातक मेनिन्जाइटिस र इन्सेफलाइटिस जस्ता गम्भीर रोगहरू निम्त्याउन सक्छ, विशेष गरी इम्युनोकम्प्रोमाइज्ड बिरामीहरूमा।यद्यपि, टोक्सोप्लाज्मा गोन्डीले इम्युनो सक्षम व्यक्तिहरूमा कोशिकाको वृद्धि र प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाहरू परिमार्जन गरेर संक्रमित होस्टको वातावरणलाई पनि परिवर्तन गर्न सक्छ, जसले एसिम्प्टोमेटिक क्रोनिक इन्फेक्सन ९,११ को मर्मतसम्भार गर्दछ।चाखलाग्दो कुरा के छ भने, T. gondii प्रचलन र मस्तिष्क ट्यूमर घटनाहरू बीचको सम्बन्धलाई हेर्दा, केही रिपोर्टहरूले सुझाव दिन्छ कि भिभोमा क्रोनिक T. gondii संक्रमणको कारणले वातावरणीय परिवर्तनहरू ट्युमरको सूक्ष्म वातावरणसँग मिल्दोजुल्दो छ।
एक्सोसोमहरू इन्टरसेलुलर कम्युनिकेटरहरू भनेर चिनिन्छन् जसले छिमेकी कोशिकाहरूबाट प्रोटीन र न्यूक्लिक एसिडहरू सहित जैविक सामग्रीहरू डेलिभर गर्दछ 16,17।एक्सोसोमहरूले ट्युमर-सम्बन्धित जैविक प्रक्रियाहरू जस्तै एन्टी-एपोप्टोसिस, एन्जियोजेनेसिस, र ट्युमर सूक्ष्म वातावरणमा मेटास्टेसिसलाई प्रभाव पार्न सक्छ।विशेष गरी, miRNAs (miRNAs), सानो गैर-कोडिङ RNAs लम्बाइमा 22 न्यूक्लियोटाइडहरू, महत्त्वपूर्ण पोस्ट-ट्रान्सक्रिप्शनल जीन नियामकहरू हुन् जसले miRNA-प्रेरित साइलेन्सिङ कम्प्लेक्स (miRISC) मार्फत मानव mRNA को 30% भन्दा बढी नियन्त्रण गर्दछ।Toxoplasma gondii ले संक्रमित होस्टहरूमा miRNA अभिव्यक्तिलाई नियन्त्रण गरेर जैविक प्रक्रियाहरूलाई बाधा पुर्‍याउन सक्छ।होस्ट miRNAs मा परजीवीको अस्तित्व रणनीति हासिल गर्न होस्ट जैविक प्रक्रियाहरू नियमन गर्न महत्त्वपूर्ण संकेतहरू हुन्छन्।यसरी, T. gondii को संक्रमण हुँदा होस्ट miRNA प्रोफाइलमा परिवर्तनहरू अध्ययन गर्दा हामीलाई होस्ट र T. gondii बीचको अन्तरक्रियालाई अझ स्पष्ट रूपमा बुझ्न मद्दत गर्न सक्छ।वास्तवमा, तिरुग्नानम एट अल।15 ले सुझाव दियो कि T. gondii ले ट्युमरको वृद्धिसँग सम्बन्धित विशिष्ट होस्ट miRNAs मा यसको अभिव्यक्ति परिवर्तन गरेर मस्तिष्क कार्सिनोजेनेसिसलाई बढावा दिन्छ र T. gondii ले प्रयोगात्मक जनावरहरूमा ग्लियोमास निम्त्याउन सक्छ।
यो अध्ययन Toxoplasma BV2 बाट संक्रमित होस्ट माइक्रोग्लियामा exosomal miR-21 को परिवर्तनमा केन्द्रित छ।हामीले FoxO1/p27 को न्यूक्लियसमा अवधारणको कारण U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूको वृद्धिमा परिवर्तन गरिएको exosomal miR-21 को सम्भावित भूमिका अवलोकन गर्‍यौं, जुन overexpressed miR-21 को लक्ष्य हो।
BV2 बाट व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू डिफरेंशियल सेन्ट्रीफ्यूगेशन प्रयोग गरेर प्राप्त गरियो र सेलुलर कम्पोनेन्टहरू वा अन्य भेसिकलहरूसँग प्रदूषण रोक्न विभिन्न विधिहरूद्वारा प्रमाणित गरियो।SDS-polyacrylamide जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस (SDS-PAGE) ले BV2 कोशिकाहरू र एक्सोसोमहरू (चित्र 1A) बाट निकालिएका प्रोटिनहरू बीचको फरक ढाँचाहरू देखायो, र नमूनाहरू एलिक्सको उपस्थितिको लागि मूल्याङ्कन गरियो, जसलाई एक्सोसोमल प्रोटीन मार्करहरूको पश्चिमी ब्लटिंगद्वारा विश्लेषण गरिएको थियो।एलिक्स लेबलिङ एक्सोसोम प्रोटीनहरूमा फेला पर्यो तर BV2 सेल लाइसेट प्रोटीनहरूमा फेला परेन (चित्र 1B)।थप रूपमा, BV2 बाट व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूबाट शुद्ध आरएनए बायोएनालाइजर प्रयोग गरेर विश्लेषण गरिएको थियो।18S र 28S राइबोसोमल सबयुनिटहरू एक्सोसोमल आरएनए माइग्रेसन ढाँचामा विरलै देखिएका थिए, जसले भरपर्दो शुद्धता (चित्र 1C) संकेत गर्दछ।अन्तमा, ट्रान्समिशन इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोपीले देखाएको एक्सोसोमहरू लगभग 60-150 एनएम आकारका थिए र तिनीहरूको एक्सोसोम मोर्फोलोजी (चित्र 1D) को विशिष्ट कप जस्तो संरचना थियो।
BV2 कक्षहरूबाट व्युत्पन्न exosomes को विशेषता।(A) सुरक्षा डाटा पाना पृष्ठ।प्रोटीनहरू BV2 कोशिकाहरू वा BV2 बाट व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूबाट अलग थिए।कोशिकाहरू र एक्सोसोमहरू बीचको प्रोटीन ढाँचाहरू फरक हुन्छन्।(B) एक एक्सोसोमल मार्कर (एलिक्स) को पश्चिमी धब्बा विश्लेषण।(C) BV2 कोशिकाहरू र BV2 व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूबाट शुद्ध आरएनएको मूल्याङ्कन बायोएनालाइजर प्रयोग गरी।यसैले, BV2 कोशिकाहरूमा 18S र 28S राइबोसोमल सबयुनिटहरू एक्सोसोमल आरएनएमा विरलै भेटिए।(D) ट्रान्समिशन इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोपीले BV2 कोशिकाहरूबाट अलग गरिएको एक्सोसोमहरू 2% यूरेनिल एसीटेटसँग नकारात्मक रूपमा दाग भएको देखाएको छ।Exosomes लगभग 60-150 nm आकार र कप आकार (गीत र जंग, अप्रकाशित डेटा) मा छन्।
U87 मानव ग्लियोमा कोशिकाहरूमा BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूको सेलुलर आन्तरिककरण कन्फोकल माइक्रोस्कोपी प्रयोग गरेर अवलोकन गरिएको थियो।PKH26 लेबल गरिएको एक्सोसोमहरू U87 कोशिकाहरूको साइटोप्लाज्ममा स्थानीयकृत हुन्छन्।न्यूक्लीलाई DAPI (चित्र 2A) ले दाग गरिएको थियो, यसले संकेत गर्दछ कि BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू होस्ट कोशिकाहरूद्वारा आन्तरिककरण गर्न सकिन्छ र प्राप्तकर्ता कोशिकाहरूको वातावरणलाई प्रभाव पार्छ।
BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमको U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूमा आन्तरिककरण र Toxoplasma RH बाट संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूको प्रसार।(A) कन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा मापन गरिएको U87 कोशिकाहरू द्वारा घेरिएको Exosomes।U87 ग्लियोमा कोशिकाहरू PKH26 (रातो) लेबल गरिएको एक्सोसोमहरू वा 24 घण्टाको लागि नियन्त्रण बिना इन्क्युबेटेड थिए।न्यूक्लीलाई DAPI (नीलो) ले दाग गरिएको थियो र त्यसपछि कन्फोकल माइक्रोस्कोप (स्केल बार: 10 μm, x 3000) अन्तर्गत अवलोकन गरियो।(B) U87 glioma सेल प्रसार सेल प्रसार परख द्वारा निर्धारित गरिएको थियो।U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूलाई संकेत गरिएको समयको लागि एक्सोसोमहरूसँग उपचार गरियो। *P <0.05 विद्यार्थीको टी परीक्षण द्वारा प्राप्त भएको थियो। *P <0.05 विद्यार्थीको टी परीक्षण द्वारा प्राप्त भएको थियो। *P <0,05 получено по t-критерию Стьюдента। *विद्यार्थीको टी-टेस्ट द्वारा P <0.05। *P <0.05 通过学生t 检验获得। *P <0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента। * P <0.05 विद्यार्थीको टी-टेस्ट प्रयोग गरेर प्राप्त भयो।
U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूमा BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूको आन्तरिककरण पुष्टि गरेपछि, हामीले मानव ग्लियोमा कोशिकाहरूको विकासमा BV2-व्युत्पन्न टोक्सोप्लाज्मा-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूको भूमिकाको अनुसन्धान गर्न कोशिका प्रसार परखहरू प्रदर्शन गर्यौं।T. gondii-संक्रमित BV2 कोशिकाहरूबाट exosomes भएका U87 कोषहरूको उपचारले T. gondii-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूले नियन्त्रणको तुलनामा U87 कोशिकाहरूको उल्लेखनीय रूपमा उच्च प्रसार भएको देखाएको छ (चित्र 2B)।
थप रूपमा, U118 कोशिकाहरूको वृद्धिले U87 जस्तै नतिजाहरू पाएको थियो, जस्तै Toxoplasma उत्तेजित exosomes ले उच्च स्तरको प्रसारको कारण बनाउँछ (डेटा देखाइएको छैन)।यी डेटाको आधारमा, हामी संकेत गर्न सक्छौं कि BV2-व्युत्पन्न टोक्सोप्लाज्मा-संक्रमित एक्सोसोमहरूले ग्लियोमा सेल प्रसारमा महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्छन्।
ट्युमर विकासमा Toxoplasma-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूको प्रभावको अनुसन्धान गर्न, हामीले Xenograft मोडेलको लागि U87 glioma कोशिकाहरूलाई नग्न मुसाहरूमा इन्जेक्ट गर्यौं र BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू वा RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू इन्जेक्ट गर्यौं।1 हप्ता पछि ट्यूमरहरू स्पष्ट भए पछि, 5 मुसाको प्रत्येक प्रयोगात्मक समूहलाई ट्यूमरको साइज अनुसार एउटै सुरु बिन्दु निर्धारण गर्न विभाजित गरियो, र ट्यूमरको आकार 22 दिनको लागि मापन गरियो।
U87 xenograft मोडेलको साथ मुसाहरूमा, BV2-व्युत्पन्न RH-संक्रमित एक्सोसोम समूहमा 22 दिन (चित्र 3A,B) मा उल्लेखनीय रूपमा ठूलो ट्युमरको आकार र तौल देखियो।अर्कोतर्फ, BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम समूह र एक्सोसोम उपचार पछि नियन्त्रण समूह बीच ट्यूमर आकारमा कुनै महत्त्वपूर्ण भिन्नता थिएन।थप रूपमा, ग्लियोमा कोशिकाहरू र एक्सोसोमहरूद्वारा इन्जेक्सन गरिएका मुसाहरूले RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू (चित्र 3C) को समूहमा सबैभन्दा ठूलो ट्युमरको मात्रा देखाउँछन्।यी नतिजाहरूले देखाउँछन् कि BV2-व्युत्पन्न टोक्सोप्लाज्मा-संक्रमित एक्सोसोमहरूले माउस ट्यूमर मोडेलमा ग्लियोमा वृद्धिलाई प्रेरित गर्दछ।
U87 xenograft माउस मोडेलमा BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूको Oncogenesis (AC)।ट्युमर साइज (A) र वजन (B) BALB/c नग्न मुसाहरूमा BV2 बाट व्युत्पन्न RH-संक्रमित एक्सोसोमहरूसँग उपचार गरिएको थियो।BALB/c नग्न चूहों (C) लाई म्याट्रिजेल मिश्रणमा निलम्बित 1 x 107 U87 कोशिकाहरूको साथ सबकुटेनियस इन्जेक्सन गरिएको थियो।इंजेक्शन लगाएको छ दिन पछि, 100 μg BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू मुसाहरूमा उपचार गरियो।ट्यूमरको आकार र वजन क्रमशः संकेत गरिएका दिनहरूमा र बलिदान पछि मापन गरिएको थियो। *P <0.05। *P <0.05। *R <0,05। *P <0.05। *P <0.05। *P <0.05। *R <0,05। *P <0.05।
डेटाले देखाएको छ कि 37 miRNAs (16 ओभरएक्सप्रेस र 21 डाउनएक्सप्रेस) प्रतिरक्षा वा ट्युमरको विकाससँग सम्बन्धित माईक्रोग्लियामा Toxoplasma RH स्ट्रेन (चित्र 4A) को संक्रमण पछि उल्लेखनीय रूपमा परिवर्तन भएको थियो।परिवर्तन गरिएका miRNA हरू बीच miR-21 को सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तरहरू वास्तविक-समय RT-PCR द्वारा BV2 बाट व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू, BV2 र U87 कोशिकाहरूसँग उपचार गरिएका एक्सोसोमहरूमा पुष्टि गरिएको थियो।miR-21 को अभिव्यक्तिले Toxoplasma gondii (RH स्ट्रेन) (Fig. 4B) बाट संक्रमित BV2 कोषहरूबाट एक्सोसोमहरूमा उल्लेखनीय वृद्धि देखाएको छ।BV2 र U87 कोशिकाहरूमा miR-21 को सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तरहरू परिवर्तन गरिएका एक्सोसोमहरू (चित्र 4B) को अपटेक पछि बढ्यो।ट्युमर रोगी र टोक्सोप्लाज्मा गोन्डी (ME49 स्ट्रेन) बाट संक्रमित मुसाहरूको मस्तिष्कको तन्तुहरूमा miR-21 अभिव्यक्तिको सापेक्षिक स्तर क्रमशः नियन्त्रणमा भन्दा बढी थियो (चित्र 4C)।यी नतिजाहरू भिट्रो र भिभोमा भविष्यवाणी गरिएको र पुष्टि गरिएका माइक्रोआरएनएहरूको अभिव्यक्ति स्तरहरू बीचको भिन्नतासँग सम्बन्धित छन्।
Toxoplasma gondii (RH) बाट संक्रमित माइक्रोग्लियामा exosomal miP-21a-5p को अभिव्यक्तिमा परिवर्तनहरू।(A) T. gondii RH संक्रमण पछि प्रतिरक्षा वा ट्युमर विकाससँग सम्बन्धित siRNA मा महत्त्वपूर्ण परिवर्तनहरू देखाउँछ।(B) सापेक्ष miR-21 अभिव्यक्ति स्तरहरू वास्तविक-समय RT-PCR द्वारा BV2-व्युत्पन्न exosomes, BV2-उपचार गरिएको exosomes, र U87 कोशिकाहरूमा पत्ता लगाइयो।(C) सापेक्ष miR-21 अभिव्यक्ति स्तरहरू ट्युमर बिरामीहरू (N=3) र टोक्सोप्लाज्मा गोन्डी (ME49 स्ट्रेन) (N=3) बाट संक्रमित मुसाहरूको मस्तिष्क टिश्युहरूमा फेला पर्यो। *P <0.05 विद्यार्थीको टी परीक्षण द्वारा प्राप्त भएको थियो। *P <0.05 विद्यार्थीको टी परीक्षण द्वारा प्राप्त भएको थियो। *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента। *P <0.05 विद्यार्थीको टी-टेस्ट प्रयोग गरेर प्राप्त गरिएको थियो। *P <0.05 通过学生t 检验获得। *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента। * P <0.05 विद्यार्थीको टी-टेस्ट प्रयोग गरेर प्राप्त भयो।
RH-संक्रमित BV2 कोशिकाहरूका एक्सोसोमहरूले भिभो र इन भिट्रो (चित्र 2, 3) मा ग्लियोमासको वृद्धि निम्त्यायो।सान्दर्भिक mRNAs पत्ता लगाउन, हामीले BV2 वा RH BV2 बाट व्युत्पन्न exosomes बाट संक्रमित U87 कोशिकाहरूमा एन्टिट्यूमर लक्ष्य जीन, फोर्कहेड बक्स O1 (FoxO1), PTEN, र प्रोग्राम गरिएको सेल मृत्यु 4 (PDCD4) को mRNA स्तरहरू जाँच्यौं।बायोइन्फर्मेटिक्स विश्लेषणले FoxO1, PTEN, र PDCD4 जीनहरू सहित धेरै ट्यूमर-सम्बन्धित जीनहरूमा miR-2121,22 बाध्यकारी साइटहरू छन् भनेर देखाएको छ।RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूमा BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू (चित्र 5A) को तुलनामा एन्टिट्यूमर लक्ष्य जीनको mRNA स्तर घटाइएको थियो।FoxO1 ले BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम (चित्र 5B) को तुलनामा RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूमा प्रोटिनको स्तर कम देखाएको छ।यी नतिजाहरूको आधारमा, हामीले RH-संक्रमित BV2 बाट व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूले ट्यूमरको वृद्धिमा आफ्नो भूमिका कायम राख्दै एन्टि-अन्कोजेनिक जीनलाई डाउनरेगुलेट गर्छ भनी पुष्टि गर्न सक्छौं।
टोक्सोप्लाज्मा RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूले U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूमा टोक्सोप्लाज्मा RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूद्वारा एन्टिट्यूमर जीनहरूको दमनलाई प्रेरित गर्छ।(A) PBS exosomes को तुलनामा T. gondii RH-संक्रमित BV2 बाट व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूमा FoxO1, PTEN र PDCD4 अभिव्यक्तिको वास्तविक-समय PCR।β-actin mRNA नियन्त्रणको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो।(B) FoxO1 अभिव्यक्ति पश्चिमी ब्लोटिंग द्वारा निर्धारण गरिएको थियो र densitometry डाटा सांख्यिकीय रूपमा ImageJ कार्यक्रम प्रयोग गरेर मूल्याङ्कन गरिएको थियो। *P <0.05 विद्यार्थीको टी परीक्षण द्वारा प्राप्त भएको थियो। *P <0.05 विद्यार्थीको टी परीक्षण द्वारा प्राप्त भएको थियो। *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента। *P <0.05 विद्यार्थीको टी-टेस्ट प्रयोग गरेर प्राप्त गरिएको थियो। *P <0.05 通过学生t 检验获得। *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента। * P <0.05 विद्यार्थीको टी-टेस्ट प्रयोग गरेर प्राप्त भयो।
ट्युमर-सम्बन्धित जीन नियमनमा एक्सोसोमहरूमा miP-21 को प्रभाव बुझ्नको लागि, U87 कोशिकाहरूलाई Lipofectamine 2000 को प्रयोग गरेर miP-21 को अवरोधकद्वारा ट्रान्सफेक्ट गरिएको थियो र कोशिकाहरू ट्रान्सफेक्सनको 24 घण्टा पछि काटिएका थिए।FoxO1 र p27 अभिव्यक्ति स्तरहरू miR-21 अवरोधकहरूद्वारा ट्रान्सफेक्ट गरिएका कक्षहरूमा qRT-PCR (चित्र 6A,B) को प्रयोग गरी BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूसँग उपचार गरिएका कक्षहरूसँग तुलना गरिएको थियो।U87 कोशिकाहरूमा miR-21 अवरोधकको ट्रान्सफेक्सनले FoxO1 र p27 अभिव्यक्तिलाई महत्त्वपूर्ण रूपमा डाउनरेगुलेट गर्‍यो (FIG। 6)।
RH-संक्रमित exosomal BV2-व्युत्पन्न miP-21 ले U87 glioma कोशिकाहरूमा FoxO1/p27 अभिव्यक्ति परिवर्तन गर्यो।U87 कोशिकाहरूलाई MiP-21 अवरोधक Lipofectamine 2000 प्रयोग गरेर ट्रान्सफेक्सन गरिएको थियो र सेलहरू ट्रान्सफेक्सनको 24 घण्टा पछि काटिएको थियो।FoxO1 र p27 अभिव्यक्ति स्तरहरू miR-21 inhibitors बाट ट्रान्सफेक्ट गरिएका कोशिकाहरूमा qRT-PCR (A, B) को प्रयोग गरेर BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरूसँग उपचार गरिएका स्तरहरूसँग तुलना गरिएको थियो।
होस्टको प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाबाट बच्न, टोक्सोप्लाज्मा परजीवी टिश्यु सिस्टमा परिणत हुन्छ।तिनीहरूले होस्टको जीवनकालभर मस्तिष्क, हृदय, र कंकाल मांसपेशी सहित विभिन्न तन्तुहरूलाई परजीवी बनाउँछन् र होस्टको प्रतिरक्षा प्रतिक्रियालाई परिमार्जन गर्छन्।थप रूपमा, तिनीहरूले कोशिका चक्र र होस्ट कोशिकाहरूको एपोप्टोसिसलाई विनियमित गर्न सक्छन्, तिनीहरूको प्रसार 14,24 लाई बढावा दिन्छ।टोक्सोप्लाज्मा गोन्डीले मुख्यतया होस्ट डेन्ड्राइटिक कोशिकाहरू, न्युट्रोफिलहरू, र मोनोसाइट/म्याक्रोफेज वंश, मस्तिष्क माइक्रोग्लिया सहित संक्रमित गर्दछ।टोक्सोप्लाज्मा गोन्डीले M2 फेनोटाइपको म्याक्रोफेजको भिन्नतालाई प्रेरित गर्दछ, रोगजनक संक्रमण पछि घाउ निको पार्ने कार्यलाई असर गर्छ, र हाइपरभास्कुलराइजेशन र ग्रेनुलोमेटस फाइब्रोसिससँग पनि सम्बन्धित छ।टोक्सोप्लाज्मा संक्रमणको यो व्यवहारिक रोगजनन ट्यूमर विकाससँग सम्बन्धित मार्करहरूसँग सम्बन्धित हुन सक्छ।Toxoplasma द्वारा विनियमित शत्रुतापूर्ण वातावरण सम्बन्धित precancer जस्तै हुन सक्छ।तसर्थ, यो मान्न सकिन्छ कि टोक्सोप्लाज्मा संक्रमणले मस्तिष्क ट्यूमरको विकासमा योगदान गर्नुपर्छ।वास्तवमा, विभिन्न मस्तिष्क ट्युमर भएका बिरामीहरूको सीरममा टोक्सोप्लाज्मा संक्रमणको उच्च दर रिपोर्ट गरिएको छ।थप रूपमा, Toxoplasma gondii अर्को कार्सिनोजेनिक प्रभावकारी हुन सक्छ र अन्य संक्रामक कार्सिनोजेनहरूलाई मस्तिष्क ट्यूमरहरू विकास गर्न मद्दत गर्नको लागि समन्वयात्मक रूपमा कार्य गर्दछ।यस सन्दर्भमा, यो ध्यान दिन लायक छ कि P. falciparum र Epstein-Barr भाइरस synergistically Burkitt's lymphoma को गठन मा योगदान गर्दछ।
क्यान्सर अनुसन्धानको क्षेत्रमा नियामकको रूपमा एक्सोसोमको भूमिका व्यापक रूपमा अनुसन्धान गरिएको छ।यद्यपि, परजीवी र संक्रमित होस्टहरू बीचको एक्सोसोमको भूमिकालाई राम्रोसँग बुझिएको छैन।अहिलेसम्म, स्रावित प्रोटिनहरू सहित विभिन्न नियामकहरूले जैविक प्रक्रियाहरू वर्णन गरेका छन् जसद्वारा प्रोटोजोआन परजीवीहरूले होस्ट आक्रमणको प्रतिरोध गर्छन् र संक्रमणलाई स्थायी बनाउँछन्।भर्खरै, त्यहाँ बढ्दो अवधारणा भएको छ कि प्रोटोजोआ-सम्बन्धित माइक्रोभेसिकलहरू र तिनीहरूको माइक्रोआरएनएहरूले तिनीहरूको अस्तित्वको लागि अनुकूल वातावरण सिर्जना गर्न होस्ट कोशिकाहरूसँग अन्तरक्रिया गर्छन्।तसर्थ, परिवर्तन गरिएको exosomal miRNAs र glioma सेल प्रसार बीचको सम्बन्ध पत्ता लगाउन थप अध्ययनहरू आवश्यक छ।माइक्रोआरएनए परिवर्तन (क्लस्टर जीन miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 र miR-17-92) टोक्सोप्लाज्मा-संक्रमित मानव म्याक्रोफेजहरूमा STAT3 प्रवर्द्धकसँग बाँधिन्छ, विनियमित हुन्छ र विरोधीलाई प्रेरित गर्दछ। -टोक्सोप्लाज्मा गोन्डी संक्रमणको प्रतिक्रियामा एपोप्टोसिस 29।टोक्सोप्लाज्मा संक्रमणले miR-17-5p र miR-106b-5p को अभिव्यक्ति बढाउँछ, जुन धेरै हाइपरप्रोलिफेरेटिव रोगहरू 30 सँग सम्बन्धित छन्।यी डाटाहरूले सुझाव दिन्छ कि टोक्सोप्लाज्मा संक्रमण द्वारा विनियमित होस्ट miRNA हरू परजीवीहरूको अस्तित्व र होस्ट जैविक व्यवहारमा रोगजननका लागि महत्त्वपूर्ण अणुहरू हुन्।
परिवर्तन गरिएका miRNAs ले ग्लियोमास सहित घातक कोशिकाहरूको प्रारम्भ र प्रगतिको क्रममा विभिन्न प्रकारका व्यवहारहरूलाई प्रभाव पार्न सक्छ: वृद्धि संकेतहरूको आत्म-पर्याप्तता, वृद्धि-निरोधक संकेतहरूको असंवेदनशीलता, एपोप्टोसिस चोरी, असीमित प्रतिकृति क्षमता, एन्जियोजेनेसिस, आक्रमण र मेटास्टेसिस, र इन्फ्लाम।ग्लोमामा, धेरै अभिव्यक्ति प्रोफाइलिङ अध्ययनहरूमा परिवर्तन गरिएका miRNAs पहिचान गरिएको छ।
हालको अध्ययनमा, हामीले टोक्सोप्लाज्मा-संक्रमित होस्ट कोशिकाहरूमा miRNA-21 अभिव्यक्तिको उच्च स्तर पुष्टि गर्यौं।miR-21 लाई ग्लियोमास, 33 लगायत ठोस ट्युमरहरूमा प्रायः ओभरएक्सप्रेस गरिएको माइक्रोआरएनए मध्ये एकको रूपमा पहिचान गरिएको छ र यसको अभिव्यक्ति ग्लियोमाको ग्रेडसँग सम्बन्धित छ।जम्मा हुने प्रमाणहरूले सुझाव दिन्छ कि miR-21 एक उपन्यास ओन्कोजीन हो जसले ग्लोमा वृद्धिमा एन्टी-अपोप्टोटिक कारकको रूपमा कार्य गर्दछ र मानव मस्तिष्कको घातक रोगको ऊतक र प्लाज्मामा अत्यधिक मात्रामा अभिव्यक्त हुन्छ।चाखलाग्दो कुरा के छ भने, ग्लियोमा कोशिकाहरू र ऊतकहरूमा miR-21 निष्क्रियताले क्यास्पेस-निर्भर एपोप्टोसिसको कारण सेल प्रसारको अवरोधलाई ट्रिगर गर्दछ।miR-21 अनुमानित लक्ष्यहरूको जैव सूचनात्मक विश्लेषणले एपोप्टोसिस मार्गहरूसँग सम्बन्धित धेरै ट्यूमर सप्रेसर जीनहरू पत्ता लगाए, जसमा प्रोग्राम गरिएको सेल मृत्यु 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, र फोर्कहेड बक्स O1 (FoxO1), miR-2121 बाध्यकारी साइट सहित।.२२.३८।
FoxO1, ट्रान्सक्रिप्शन कारकहरू (FoxO) मध्ये एकको रूपमा, विभिन्न प्रकारका मानव क्यान्सरको विकासमा संलग्न छ र p21, p27, Bim, र FasL40 जस्ता ट्युमर सप्रेसर जीनहरूको अभिव्यक्तिलाई विनियमित गर्न सक्छ।FoxO1 ले कोशिकाको वृद्धिलाई दबाउन p27 जस्ता सेल चक्र अवरोधकहरूलाई बाँध्न र सक्रिय गर्न सक्छ।यसबाहेक, FoxO1 PI3K/Akt सिग्नलिङको प्रमुख प्रभावकर्ता हो र p2742 ट्रान्सक्रिप्शनको सक्रियता मार्फत सेल चक्र प्रगति र सेल भिन्नता जस्ता धेरै जैविक प्रक्रियाहरूलाई नियमन गर्छ।
निष्कर्षमा, हामी विश्वास गर्छौं कि टोक्सोप्लाज्मा-संक्रमित माइक्रोग्लियाबाट व्युत्पन्न exosomal miR-21 ले ग्लोमा कोशिकाहरूको वृद्धि नियामकको रूपमा महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्न सक्छ (चित्र 7)।यद्यपि, exosomal miR-21, बदलिएको टोक्सोप्लाज्मा संक्रमण, र ग्लियोमा वृद्धि बीचको प्रत्यक्ष सम्बन्ध पत्ता लगाउन थप अध्ययनहरू आवश्यक छ।यी नतिजाहरूले टोक्सोप्लाज्मा संक्रमण र ग्लियोमाको घटनाहरू बीचको सम्बन्धको अध्ययनको लागि सुरुवात बिन्दु प्रदान गर्ने अपेक्षा गरिएको छ।
यस अध्ययनमा ग्लोमा (मस्तिष्क) कार्सिनोजेनेसिसको संयन्त्रको योजनाबद्ध रेखाचित्र प्रस्ताव गरिएको छ।लेखकले PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) मा कोरेका छन्।
यस अध्ययनका सबै प्रयोगात्मक प्रोटोकलहरू, जनावरहरूको प्रयोग सहित, सियोल नेश्नल युनिभर्सिटी एनिमल केयर र प्रयोगकर्ता समिति मानक नैतिक दिशानिर्देशहरू अनुरूप थिए र सियोल नेश्नल युनिभर्सिटी स्कूल अफ मेडिसिनको संस्थागत समीक्षा बोर्ड (IRB नम्बर SNU- 150715)।-२)।सबै प्रयोगात्मक प्रक्रियाहरू ARRIVE सिफारिसहरू अनुसार गरिएको थियो।
BV2 माउस माइक्रोग्लिया र U87 मानव ग्लियोमा कोशिकाहरू Dulbecco को परिमार्जित ईगलको माध्यम (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) र रोजवेल पार्क मेमोरियल इन्स्टिच्युटको माध्यम (RPMI; Welgene) मा क्रमशः 10% भ्रूण बोवाइन सीरम, ml-4 समावेश गरिएको थियो। ग्लुटामाइन, ०.२ एमएम पेनिसिलिन र ०.०५ एमएम स्ट्रेप्टोमाइसिन।३७ डिग्री सेल्सियसमा ५% CO2 भएको इनक्यूबेटरमा कोशिकाहरूलाई कल्चर गरिएको थियो।अर्को ग्लोमा सेल लाइन, U118, U87 कोशिकाहरूसँग तुलनाको लागि प्रयोग गरिएको थियो।
T. gondii-संक्रमित RH र ME49 स्ट्रेनहरूबाट एक्सोसोमहरू अलग गर्न, T. gondii tachyzoites (RH स्ट्रेन) 3-4 दिन अघि 6-हप्ता पुरानो BALB/c मुसाको पेटको गुहाबाट काटिएको थियो।Tachyzoites PBS संग तीन पटक धोएर 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 43 मा सेन्ट्रीफ्युगेशन द्वारा शुद्ध गरियो।ME49 स्ट्रेनको ट्याकाइजोइट्स प्राप्त गर्न, BALB/c मुसाहरूलाई 20 टिस्यु सिस्टहरूद्वारा इन्ट्रापेरिटोनली रूपमा इन्जेक्सन गरिएको थियो र संक्रमण (PI) पछि 6-8 औं दिनमा पेटको गुहा धोएर सिस्टहरूमा ट्याकीजोइट रूपान्तरण सङ्कलन गरिएको थियो।मुसा PBS बाट संक्रमित।ME49 tachyzoites 100 μg/ml पेनिसिलिन (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL), र 5% भ्रूण बोवाइन सीरम (Lonza, Walkersville, MD) को साथ पूरक कोषहरूमा हुर्कियो। ।., USA) 37 डिग्री सेल्सियस र 5% कार्बन डाइअक्साइडमा।भेरो कोशिकाहरूमा खेती गरिसकेपछि, ME49 tachyzoites लाई 25 गेज सुई मार्फत र त्यसपछि 5 µm फिल्टर मार्फत भग्नावशेष र कोशिकाहरू हटाउनको लागि पास गरियो।धुने पछि, tachyzoites PBS44 मा पुन: निलम्बन गरियो।Toxoplasma gondii strain ME49 को टिस्यु सिस्टहरू संक्रमित C57BL/6 मुसा (ओरिएन्ट बायो एनिमल सेन्टर, Seongnam, कोरिया) को मस्तिष्कबाट अलग गरिएको सिस्टको इन्ट्रापेरिटोनियल इन्जेक्सनद्वारा राखिएको थियो।ME49-संक्रमित मुसाको दिमाग PI को 3 महिना पछि काटिएको थियो र सिस्टहरू अलग गर्न माइक्रोस्कोप अन्तर्गत कीमा गरिएको थियो।संक्रमित मुसाहरूलाई सियोल नेसनल युनिभर्सिटी स्कूल अफ मेडिसिनमा विशेष रोगजनक-मुक्त अवस्था (एसपीएफ) अन्तर्गत राखिएको थियो।
कुल RNA BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू, BV2 कोशिकाहरू र miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) को प्रयोग गरेर निर्माताको निर्देशन अनुसार निकालिएको थियो, इल्युसन चरणको लागि इन्क्युबेशन समय सहित।आरएनए एकाग्रता NanoDrop 2000 स्पेक्ट्रोफोटोमिटरमा निर्धारण गरिएको थियो।आरएनए माइक्रोएरेको गुणस्तर Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, Netherlands) को प्रयोग गरेर मूल्याङ्कन गरिएको थियो।
१०% exosome-गरीब FBS भएको DMEM 100,000g मा 16 घण्टाको लागि 4°C मा ultracentrifugation द्वारा तयार गरिएको थियो र 0.22 µm फिल्टर (Nalgene, Rochester, NY, USA) मार्फत फिल्टर गरिएको थियो।BV2 कोशिकाहरू, 5 × 105, DMEM मा 10% exosome-depleted FBS र 1% एन्टिबायोटिकहरू 37°C र 5% CO2 समावेश गरिएको थियो।इन्क्युबेशनको 24 घण्टा पछि, स्ट्रेन RH वा ME49 (MOI = 10) को tachyzoites कोशिकाहरूमा थपियो र गैर-आक्रमणकारी परजीवीहरू एक घण्टा भित्र हटाइयो र DMEM मा रिफिल गरियो।BV2 कोशिकाहरूबाट Exosomes परिमार्जित विभेदक सेन्ट्रीफ्यूगेशन द्वारा पृथक गरिएको थियो, सबैभन्दा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिएको विधि।RNA वा प्रोटीन विश्लेषणको लागि 300 μl PBS मा exosome गोली पुन: सुस्पेन्ड गर्नुहोस्।पृथक exosomes को एकाग्रता BCA प्रोटीन परख किट (Pierce, Rockford, IL, USA) र NanoDrop 2000 स्पेक्ट्रोफोटोमिटर प्रयोग गरेर निर्धारण गरिएको थियो।
BV2 कोशिकाहरू वा BV2 बाट व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू PRO-PREP™ प्रोटीन एक्स्ट्र्याक्सन समाधान (iNtRon बायोटेक्नोलोजी, Seongnam, कोरिया) मा लाइज गरियो र प्रोटिनहरू Coomassie briliant blue stained 10% SDS polyacrylamide gels मा लोड गरियो।थप रूपमा, प्रोटिनहरू 2 घण्टाको लागि PVDF झिल्लीमा स्थानान्तरण गरियो।पश्चिमी ब्लटहरू एलिक्स एन्टिबडी (सेल सिग्नलिङ टेक्नोलोजी, बेभर्ली, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) को एक्सोसोमल मार्करको रूपमा प्रयोग गरेर मान्य गरियो।HRP-संयुग्मित बाख्रा एन्टी-माउस IgG (H + L) (बेथाइल लेबोरेटरीज, मोन्टगोमेरी, TX, USA) र LAS-1000 plus luminescent छवि विश्लेषक (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) को माध्यमिक एन्टिबडीको रूपमा प्रयोग गरियो।।ट्रान्समिशन इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोपी एक्सोसोमको आकार र आकारविज्ञान अध्ययन गर्न प्रदर्शन गरिएको थियो।BV2 कोशिकाहरू (6.40 µg/µl) बाट अलग गरिएको Exosomes कार्बन-लेपित जालहरूमा तयार पारिएको थियो र 1 मिनेटको लागि 2% uranyl एसीटेटको साथ नकारात्मक रूपमा दाग गरिएको थियो।तयार नमूनाहरू ES1000W Erlangshen CCD क्यामेरा (Gatan, Pleasanton, CA, USA) ले सुसज्जित JEOL 1200-EX II (टोकियो, जापान) को प्रयोग गरेर 80 kV को एक एक्सेलेरेटिङ भोल्टेजमा अवलोकन गरियो।
BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमहरू PKH26 रेड फ्लोरोसेन्ट लिंकर किट (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) को प्रयोग गरी कोठाको तापक्रममा १५ मिनेटको लागि दाग लगाइयो।U87 कोशिकाहरू, 2×105, PKH26-लेबल गरिएको एक्सोसोमहरू (रातो) वा नकारात्मक नियन्त्रणको रूपमा कुनै एक्सोसोमहरू नभएको, 5% CO2 इन्क्यूबेटरमा 24 घण्टाको लागि 37 डिग्री सेल्सियसमा इन्क्युबेटेड गरियो।U87 सेल न्यूक्लीलाई DAPI (नीलो) ले दाग गरिएको थियो, U87 कोशिकाहरूलाई 4% paraformaldehyde मा 15 मिनेटको लागि 4°C मा फिक्स गरियो र त्यसपछि Leica TCS SP8 STED CW कन्फोकल माइक्रोस्कोप प्रणाली (Leica Microsystems, Mannheim, Germany) मा विश्लेषण गरियो।अवलोकनयोग्य।
cDNA siRNA बाट Mir-X siRNA पहिलो स्ट्र्यान्ड संश्लेषण र SYBR qRT-PCR किट (Takara Bio Inc., Shiga, Japan) को प्रयोग गरेर संश्लेषित गरिएको थियो।वास्तविक समय मात्रात्मक PCR iQ5 वास्तविक समय PCR पत्ता लगाउने प्रणाली (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) प्रयोग गरी प्राइमर र टेम्प्लेटहरू SYBR प्रिमिक्ससँग मिसाएर प्रदर्शन गरिएको थियो।15 सेकेन्डको लागि 95 डिग्री सेल्सियसमा विकृतिकरणको 40 चक्रहरू र 60 सेकेन्डका लागि 60 डिग्री सेल्सियसमा एनिलिङको लागि डीएनए विस्तार गरिएको थियो।प्रत्येक PCR प्रतिक्रियाबाट प्राप्त डाटा iQ™5 अप्टिकल प्रणाली सफ्टवेयर (बायो-रेड) को डाटा विश्लेषण मोड्युल प्रयोग गरेर विश्लेषण गरिएको थियो।चयनित लक्ष्य जीनहरू र β-actin/siRNA (र U6) बीच जीन अभिव्यक्तिमा सापेक्ष परिवर्तनहरू मानक वक्र विधि प्रयोग गरेर गणना गरिएको थियो।प्रयोग गरिएका प्राइमर अनुक्रमहरू तालिका 1 मा देखाइएको छ।
3 x 104 U87 ग्लियोमा कोशिकाहरूलाई 96-वेल प्लेटहरूमा सीड गरिएको थियो र BV2 (50 μg/mL) बाट व्युत्पन्न टोक्सोप्लाज्मा-संक्रमित एक्सोसोमहरू वा BV2 (50 μg/mL) बाट व्युत्पन्न ननपल्स एक्सोसोमहरू 12, 18 र 13 घण्टामा नियन्त्रण गरिएको थियो। ।सेल काउन्टिङ किट-८ (डोजिन्डो, कुमामोटो, जापान) (पूरक फिगर S1-S3) 46 को प्रयोग गरेर सेल प्रसार दर निर्धारण गरिएको थियो।
5-हप्ता पुरानो महिला BALB/c नग्न मुसा ओरिएन्ट बायो (Seongnam-si, दक्षिण कोरिया) बाट खरिद गरिएको थियो र कोठाको तापमान (22 ± 2 डिग्री सेल्सियस) र आर्द्रता (45 ± 15 डिग्री सेल्सियस) मा बाँझ पिंजराहरूमा व्यक्तिगत रूपमा राखिएको थियो।%) कोठाको तापक्रम (22±2°C) र आर्द्रता (45±15%)।एसपीएफ (सियोल नेसनल युनिभर्सिटी स्कूल अफ मेडिसिन एनिमल सेन्टर) अन्तर्गत १२-घण्टा प्रकाश चक्र र १२-घण्टा अँध्यारो चक्र प्रदर्शन गरिएको थियो।मुसाहरूलाई अनियमित रूपमा प्रत्येक 5 मुसाको तीन समूहमा विभाजन गरिएको थियो र सबै समूहहरूलाई 1 x 107 U87 ग्लियोमा कोशिकाहरू र वृद्धि कारकले BD Matrigel ™ (BD Science, Miami, FL, USA) कम भएको 400 ml PBS सँग सबक्युटेनस इन्जेक्सन गरिएको थियो।ट्युमर इन्जेक्सनको छ दिन पछि, BV2 कोशिकाहरू (टक्सोप्लाज्मा संक्रमण बिना/बिना) बाट निकालिएको 200 मिलीग्राम एक्सोसोमहरू ट्युमर साइटमा इन्जेक्ट गरियो।ट्यूमर संक्रमण भएको बाईस दिन पछि, प्रत्येक समूहमा मुसाको ट्युमरको आकार हप्तामा तीन पटक क्यालिपरको साथ मापन गरिएको थियो, र ट्यूमरको मात्रा सूत्रद्वारा गणना गरिएको थियो: 0.5 × (चौडाई) × 2 × लम्बाइ।
MiRCURYTM LNA miRNA array को प्रयोग गरेर MicroRNA अभिव्यक्ति विश्लेषण, 7th जेनरेशन has, mmu र rno arrays (EXIQON, Vedbaek, डेनमार्क) ले 3100 मानव, माउस र मुसा miRNA क्याप्चर प्रोबहरू बीच 1119 राम्रा विशेषतायुक्त मुसाहरू कभर गर्दै।यस प्रक्रियाको क्रममा, 5′-फस्फेटबाट कुल RNA को 250 देखि 1000 ng बाछोको आन्द्राको अल्कालाइन फस्फेटको उपचारद्वारा हटाइयो र त्यसपछि Hy3 हरियो फ्लोरोसेन्ट डाईको लेबल लगाइयो।लेबल गरिएका नमूनाहरूलाई हाइब्रिडाइजेसन चेम्बर किट (एजिलेन्ट टेक्नोलोजी, सान्ता क्लारा, CA, USA) र हाइब्रिडाइजेशन स्लाइड किट (एजिलेन्ट टेक्नोलोजीहरू) प्रयोग गरेर माइक्रोएरे स्लाइडहरू लोड गरेर हाइब्रिडाइज गरिएको थियो।हाइब्रिडाइजेशन 16 घण्टाको लागि 56 डिग्री सेल्सियसमा गरिएको थियो, त्यसपछि माइक्रोएरेहरू निर्माताको सिफारिसहरू अनुसार धोइयो।प्रशोधित माइक्रोएरे स्लाइडहरू त्यसपछि Agilent G2565CA माइक्रोएरे स्क्यानर प्रणाली (Agilent Technologies) प्रयोग गरेर स्क्यान गरियो।स्क्यान गरिएका तस्बिरहरू Agilent Feature Extraction सफ्टवेयर संस्करण 10.7.3.1 (Agilent Technologies) प्रयोग गरेर आयात गरिएका थिए र परिमार्जित Exiqon प्रोटोकलको सम्बन्धित GAL फाइल प्रयोग गरेर प्रत्येक छविको फ्लोरोसेन्स तीव्रता परिमाण गरिएको थियो।हालको अध्ययनको लागि माइक्रोएरे डाटा पहुँच नम्बर GPL32397 अन्तर्गत GEO डाटाबेसमा जम्मा गरिएको छ।
टोक्सोप्लाज्माबाट संक्रमित RH वा ME49 स्ट्रेनहरूको माइक्रोग्लियामा परिपक्व एक्सोसोमल miRNAs को अभिव्यक्ति प्रोफाइलहरू विभिन्न नेटवर्क उपकरणहरू प्रयोग गरेर विश्लेषण गरियो।ट्युमर विकाससँग सम्बन्धित miRNAs miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) को प्रयोग गरेर पहिचान गरियो र 8.0 भन्दा बढी सामान्यीकृत संकेत तीव्रता (log2) को साथ फिल्टर गरियो।miRNA हरू मध्ये, T. gondii बाट संक्रमित RH वा ME49 स्ट्रेनहरू द्वारा परिमार्जन गरिएका miRNAs को फिल्टर विश्लेषणद्वारा भिन्न रूपमा व्यक्त miRNA 1.5-गुणा भन्दा बढी फेला पर्यो।
Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) को प्रयोग गरेर Opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) मा सेलहरू छ-कुवा प्लेटहरू (3 x 105 कोशिकाहरू/वेल) मा सीड गरिएको थियो।ट्रान्सफेक्टेड कोशिकाहरूलाई 6 घण्टाको लागि कल्चर गरिएको थियो र त्यसपछि माध्यमलाई ताजा पूर्ण माध्यममा परिवर्तन गरियो।कक्षहरू ट्रान्सफेक्सन पछि 24 घण्टा काटिएको थियो।
सांख्यिकीय विश्लेषण मुख्यतया एक्सेल सफ्टवेयर (Microsoft, Washington, DC, USA) को साथमा विद्यार्थीको टी-टेस्ट प्रयोग गरेर गरिएको थियो।प्रायोगिक जनावर विश्लेषणको लागि, प्रिज्म 3.0 सफ्टवेयर (ग्राफप्याड सफ्टवेयर, ला जोला, CA, संयुक्त राज्य अमेरिका) प्रयोग गरेर दुई-तर्फी ANOVA प्रदर्शन गरिएको थियो। P-मानहरू <0.05 लाई सांख्यिकीय रूपमा महत्त्वपूर्ण मानिएको थियो। P-मानहरू <0.05 लाई सांख्यिकीय रूपमा महत्त्वपूर्ण मानिएको थियो। Значения P <0,05 считались статистически значимыми। P मानहरू <0.05 सांख्यिकीय रूपमा महत्त्वपूर्ण मानिन्छ। P 值< 0.05 被认为具有统计学意义। P 值 < ०.०५ Значения P <0,05 считались статистически значимыми। P मानहरू <0.05 सांख्यिकीय रूपमा महत्त्वपूर्ण मानिन्छ।
यस अध्ययनमा प्रयोग गरिएका सबै प्रयोगात्मक प्रोटोकलहरू सियोल नेशनल युनिभर्सिटी स्कूल अफ मेडिसिन (IRB नम्बर SNU-150715-2) को संस्थागत समीक्षा बोर्ड द्वारा अनुमोदित थिए।
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
फर्ली, जे एट अल।2018 मा अनुमानित विश्वव्यापी क्यान्सर घटना र मृत्युदर: GLOBOCAN स्रोत र विधिहरू।व्याख्या।J. Ruck 144, 1941-1953 (2019)।
रशीद, एस., रहमान, के. र आकाश, एमएस मस्तिष्क ट्युमर र तिनीहरूको उपचारात्मक हस्तक्षेपहरूको जोखिम कारकहरूमा अन्तरदृष्टि। रशीद, एस., रहमान, के. र आकाश, एमएस मस्तिष्क ट्युमर र तिनीहरूको उपचारात्मक हस्तक्षेपहरूको जोखिम कारकहरूमा अन्तरदृष्टि।राशिद, एस., रहमान, के. र आकाश, एमएस मस्तिष्क ट्यूमर र प्रमुख उपचारात्मक हस्तक्षेपहरूको लागि जोखिम कारकहरूको समीक्षा। रशीद, एस., रहमान, के. र आकाश, एमएस 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施। रशीद, एस., रहमान, के. र आकाश, एमएस ब्रेन ट्युमर जोखिम कारक र चिकित्सकीय हस्तक्षेप को गहन समझ।राशिद, एस., रहमान, के. र आकाश, एमएस मस्तिष्क ट्यूमर र प्रमुख उपचारात्मक हस्तक्षेपहरूको लागि जोखिम कारकहरूको समीक्षा।बायोमेडिकल विज्ञान।फार्मासिस्ट।143, 112119 (2021)।
काटो, आई।, झाङ, जे एन्ड सन, जे। मानव ओरोडिजेस्टिव र महिला जननांग पथ क्यान्सरहरूमा ब्याक्टेरियल-भाइरल अन्तरक्रिया: एपिडेमियोलोजिक र प्रयोगशाला प्रमाणहरूको सारांश। काटो, आई।, झाङ, जे एन्ड सन, जे। मानव ओरोडिजेस्टिव र महिला जननांग पथ क्यान्सरहरूमा ब्याक्टेरियल-भाइरल अन्तरक्रिया: एपिडेमियोलोजिक र प्रयोगशाला प्रमाणहरूको सारांश।काटो आई।, झांग जे। र सन जे। मानव जठरांत्र मार्ग र महिला जननांग पथको क्यान्सरमा ब्याक्टेरियल-भाइरल अन्तरक्रिया: महामारी विज्ञान र प्रयोगशाला डाटाको सारांश। Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相中的细菌-病毒相互作用：毒相互作用：毒相互口腔消化道癌 काटो, आई।, झाङ, जे एन्ड सन, जे। मानव मौखिक गुहा पाचन र महिला प्रजनन पथमा ब्याक्टेरियो-भाइरल अन्तरक्रिया: लोकप्रिय रोग विज्ञान र प्रयोगशाला प्रमाणहरूको सारांश।काटो I., Zhang J. र Sun J. मानव गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल क्यान्सर र महिला जननांग क्यान्सरमा ब्याक्टेरियल-भाइरल अन्तरक्रिया: महामारी विज्ञान र प्रयोगशाला डाटा को सारांश।क्यान्सर १४, ४२५ (२०२२)।
Magon, KL र Parish, JL संक्रमण देखि क्यान्सर सम्म: कसरी DNA ट्युमर भाइरसहरूले होस्ट सेल केन्द्रीय कार्बन र लिपिड मेटाबोलिज्मलाई परिवर्तन गर्दछ। Magon, KL र Parish, JL संक्रमण देखि क्यान्सर सम्म: कसरी DNA ट्युमर भाइरसहरूले होस्ट सेल केन्द्रीय कार्बन र लिपिड मेटाबोलिज्मलाई परिवर्तन गर्दछ।Mahon, KL र Parish, JL फायर इन्फेक्सन टु क्यान्सर: कसरी DNA-आधारित ट्यूमर भाइरसहरूले होस्ट सेल केन्द्रीय कार्बन र लिपिड मेटाबोलिज्मलाई परिवर्तन गर्छ। Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢। Magon, KL & Parish, JL संक्रमण देखि क्यान्सर सम्म: कसरी DNA ट्युमर भाइरसहरूले होस्ट सेल केन्द्रीय कार्बन र लिपिड मेटाबोलिज्मलाई परिवर्तन गर्दछ।Mahon, KL र Parish, JL फायर्स इन्फेक्सन टु क्यान्सर: कसरी DNA ट्युमर भाइरसले होस्ट सेलहरूमा केन्द्रीय कार्बन र लिपिड मेटाबोलिज्मलाई परिवर्तन गर्छ।जीवविज्ञान खोल्नुहोस्।11, 210004 (2021)।
Correia da Costa, JM et al।स्किस्टोसोम र कलेजो फ्लुक्स र हेल्मिन्थ-सम्बन्धित क्यान्सरको क्याटेकोल एस्ट्रोजेन।अगाडि।भित्र तातो।५, ४४४ (२०१४)।